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酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法,就差你沒看過了

2023-02-13 [1384]
  酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法如下:
 
  1、確定檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
 
  2、將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
 
  3、酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。
 
  4、反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
 
  5、將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
 
  6、0.01MTBS或0.01MPBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
 
  7、將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
 
  8、0.01MTBS或0.01MPBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
 
  9、按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔差別不明顯時(shí),即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)Z長(zhǎng)不要超過30分鐘)。
 
  10、用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
 
  11、根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。
 
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