試劑盒是蛋白定量的金規(guī)范，也是免疫學(xué)研討中常用的試驗(yàn)辦法之一。很多人覺得ELISA很簡(jiǎn)單，其實(shí)不然。研域(上海)帶你繞開ELISA試驗(yàn)中出現(xiàn)的各種問(wèn)題，輕松搞定ELISA試驗(yàn)~
試驗(yàn)原理
1.包被：抗原/抗體，固相化
2.反響： 1)待測(cè)抗體/抗原； 2)酶標(biāo)抗原/抗體
3.洗滌：使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的別離
4.底物顯色：定性/定量剖析
常用辦法
1.間接法
檢測(cè)抗體常用的辦法, 首要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)。
優(yōu)勢(shì)：二抗能夠加強(qiáng)信號(hào)，并且有多種挑選能做不同的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保留它多的免疫反響性。
缺陷：交互反響發(fā)生的機(jī)率較高
2.雙抗體夾心法
檢測(cè)大分子抗原常用的辦法。
優(yōu)勢(shì)：高活絡(luò)、高專一性，抗原無(wú)須事前純化。
缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。
3.競(jìng)爭(zhēng)法
檢測(cè)小分子半抗原（藥物、激素等）。
優(yōu)勢(shì)：可適用比較不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。

不同試劑盒中的組分能否通用
除非是共用的試劑如洗液、檢測(cè)緩沖液，其它組分不主張用其它試劑盒的組分，乃至是同一目標(biāo)不同批次的試劑盒里的組分。這些組分(包含規(guī)范品、規(guī)范品稀釋液、檢測(cè)抗體、酶等)都是通過(guò)優(yōu)化的，假如輕率運(yùn)用其它試劑盒的組分，有可能對(duì)成果產(chǎn)生影響。
樣本經(jīng)不同梯度稀釋，核算得到的樣本值差異較大
有時(shí)候咱們不清楚樣本中意圖蛋白的濃度怎么，應(yīng)該怎么稀釋，那么咱們就會(huì)做下預(yù)試驗(yàn)，斷定稀釋倍數(shù)。但是有時(shí)候同一樣本做了幾個(gè)不同梯度稀釋后，核算得到的樣本值之間差異較大，應(yīng)該挑選哪一個(gè)稀釋倍數(shù)呢？
這兒觸及到了基質(zhì)效應(yīng)。一般血清樣本加樣量較高時(shí)，血清中的各種蛋白會(huì)抑制抗原抗體的接觸，基質(zhì)效應(yīng)較顯著。而通過(guò)稀釋后，攪擾要素也隨之稀釋，影響就會(huì)較小。當(dāng)某兩個(gè)梯度稀釋后，核算得到的樣本值挨近時(shí)，咱們就能夠以為在該稀釋梯度時(shí)，樣本中的攪擾要素影響較小，核算得到的值也是挨近真實(shí)的。但是這樣的稀釋是針對(duì)意圖蛋白濃度較高的樣本而言。關(guān)于濃度很低的樣本，通過(guò)多倍稀釋后，就愈加測(cè)不到了，此時(shí)可按照廠家說(shuō)明書引薦的加樣方法操作。