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選擇ELISA試劑盒的小竅門

2018-08-20 [1579]

ELISA試劑盒用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中蛋白,ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)相當(dāng)普及,絕大多數(shù)ELISA試劑盒都是用于檢測(cè)未知樣本中抗原的濃度。用試劑盒當(dāng)然比自己慢慢摸條件快得多,ELISA試劑盒不僅可以讓實(shí)驗(yàn)更便利,往往還更加。 ELISA試劑盒可用目測(cè)定性,也可用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定光密度(OD)值以反映抗原含量,靈敏度可達(dá)每毫升納克(ng)水平甚至皮克(Pg)水平。 現(xiàn)在市場(chǎng)上的人脂蛋白ELISA試劑盒既有國(guó)產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁多令人目不暇接,怎樣才能選出適用的產(chǎn)品呢?
首先當(dāng)然得根據(jù)我們所要檢測(cè)的分子進(jìn)行檢測(cè),除此以外也還有一些需要加以考量的因素。  
1. 抗體類型:?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原。 雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體(不論多抗還是單抗)的配對(duì)很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原上的同一位點(diǎn),為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突,就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題,我們可以選擇購(gòu)買“matchedpair"的捕獲/檢測(cè)抗體對(duì),這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才推薦的好組合。    
2. 實(shí)驗(yàn)類型:ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cellELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cellELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Westernblot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。    
3. 檢測(cè)方式:如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過分度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。

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